在心血管研究领域，体外模型的选择对实验结果的可靠性与转化潜力具有直接影响。新生大鼠心室肌细胞（Neonatal Rat Ventricular Myocytes, NRVMs）因其高活性、可稳定培养及功能可调控等核心优势，成为研究心脏生理病理机制、药物开发及材料生物相容性评估的重要工具。本文结合标准化实验方案和前沿研究成果，系统梳理了NRVMs的分离培养技术、关键质量控制要点及其多领域应用，为心血管研究人员提供可操作的实验参考与研究思路。

高效的分离与稳定培养是NRVMs发挥研究价值的前提。尊龙凯时生物医疗团队通过“酶解+梯度离心”技术的改良，实现了高产量、高纯度NRVMs的规模化获取，其核心流程和关键参数如下：

细胞培养步骤

第一层涂层：使用100 mg/mL聚-D-赖氨酸（Poly-D-Lysine, PDL）覆盖培养板表面，室温孵育1小时；清洗去残：用无菌蒸馏水轻柔冲洗3次以去除未结合的PDL；第二层涂层：加入15 mg/mL层粘连蛋白（Laminin）溶液，37℃恒温孵育2小时（或4℃过夜）。在此过程中，确保全程无菌操作，避免培养板在涂层过程中干燥，以确保细胞的良好贴壁效率。

细胞分离和培养流程

处理乳鼠：颈椎脱臼后用75%酒精消毒30秒；心脏分离：在无菌操作台内剪开胸腔取心，置于预冷的无菌PBS中；心室纯化：去除肺组织、血管及心房，只保留心室组织；组织剪碎：将心室剪为1-2 mm³小块，转移至含胶原酶缓冲液的15 mL EP管；恒温消化：37℃水浴锅孵育10分钟，确保酶液与组织充分接触；上清收集：吸取上清至含10%胎牛血清（FBS）的DMEM中，FBS能终止酶解，避免细胞损伤。

重复消化：补加新鲜胶原酶缓冲液，重复步骤5-6共4-6次，直至组织块基本消失；预铺板纯化：细胞悬液转移至未涂层的玻璃培养皿，37℃孵育1小时，以利用成纤维细胞的快速贴壁特性实现初步纯化；Percoll梯度分离：构建高低密度双层梯度，1800×g离心45分钟，NRVMs富集于两层界面；计数接种：台盼蓝染色检测活力，细胞直径及数量等数据。最终，按5×10⁵个/孔接种于双涂层6孔板，观察到自发搏动即为培养成功的标志。

研究应用

标准化培养的NRVMs可有效模拟体内心肌细胞功能，支持心血管领域的多项研究方向：

• 细胞周期机制：调控MEF2家族转录因子等，分析心肌细胞“退出细胞周期”的分子开关，提供心肌再生的研究靶点。
• 结构发育：利用染色标记观察肌节形成过程，揭示Wnt/β-catenin、Hippo通路在心脏结构发育中的重要作用。
• 病理模型构建：如低氧诱导的心肌缺血模型，分析细胞凋亡率及缺血损伤机制。
• 药物评估：毒性筛选与保护剂验证，评估候选药物的心肌毒性及保护效果。

借助尊龙凯时生物医疗的技术支持，研究人员能够更精准地开展基因功能研究、病毒载体验证等实验，确保结果的精准与可重复性，为心血管医学的进展做出贡献。

NRVMs以其高活力和功能可控性，成为心血管研究中“不可替代的体外桥梁”。从分离培养到应用转化，每一步操作的严谨性均直接影响实验结论的可靠性。