尊龙凯时的细胞培养和传代操作需要遵循特定的条件和步骤，以确保细胞的健康生长和实验的成功。

培养条件

气相组成为95%空气和5%二氧化碳，培养温度应维持在37℃。

传代方法

首次传代建议使用1:2的比例。传代后每两天需更换培养液。同时建议购买尊龙凯时的相关产品，以享受更优惠的价格。收到细胞后，需处理至良好状态再灌满完全培养液并密封瓶口，这样是运输细胞的最佳方法。

细胞处理步骤

收到细胞时，首先用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后将其放入超净台进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO₂的培养箱中静置3-4小时，使细胞状态稳定后再进行后续操作。

显微镜观察

使用显微镜观察细胞的生长情况，并对细胞的不同放大倍数进行拍照保存（建议40x、100x、200x各一张）。前三天的照片将作为售后重要依据，若未提供照片则默认细胞状态良好。

细胞培养步骤

贴壁细胞传代

1. 弃去培养液，用不含钙、镁离子的PBS对细胞进行1-2次润洗。
2. 添加约1-2ml的0.25%胰蛋白酶，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态，若大部分细胞变圆并脱落，迅速轻敲培养瓶，加5ml完全培养液以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落，吸出并转移至15ml离心管，1000rpm离心5分钟，弃去上清，添加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO₂的细胞培养箱中培养。

悬浮细胞传代

1. 通过半换液法处理，竖立培养瓶静置1小时，轻轻吸掉3ml培养基，补充3ml完全培养基。如果培养基变色慢，可直接加入约500ul FBS。传代时可以直接补加5ml培养基，分至两个培养瓶。一般可进行3次后再进行离心传代，去掉死细胞。
2. 采用离心换液法，收集细胞悬液于离心管中1000rpm离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml培养液重悬，按1:2的比例分装至新T25瓶中，加入6-8ml配置好的完全培养基以维持细胞的活性。后续传代可根据实际情况调整至1:2至1:5的比例。

细胞冻存与复苏

1. 当细胞生长至培养瓶覆盖80%时，废弃培养液并用PBS清洗细胞一次。
2. 添加约1ml的0.25%胰蛋白酶，观察细胞变圆后加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打使细胞脱落，然后转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀的细胞加入1ml尊龙凯时的无血清冻存液混匀后转入冻存管。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，若需转入液氮罐，需在-80℃下存放24小时以上再转入。

注意事项

某些贴壁细胞在运输过程中可能会脱落，这是正常现象。如脱落较多可将培养液收集至离心管，1000rpm离心5分钟后，收集上清进行过渡培养，并补充胰酶消化。重悬后再次离心，重悬于1-2ml完全培养液中，按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），最后放入37℃、5% CO₂培养箱中继续培养。