在细胞培养领域，贴壁细胞无疑是主流，但在免疫学、肿瘤学和生物制药等多个方面，悬浮细胞才是真正的“王者”。然而，许多科研人员在处理悬浮细胞时常常会有疑问，例如：“如何判断它们的生长状态？”“细胞密度应该控制在什么范围？”“培养基是否越多越好？”“悬浮细胞的最佳培养策略是什么？”今天，我们将重新梳理悬浮细胞的培养知识，帮助您从初学者成长为悬浮细胞的专家。

什么是悬浮细胞？

悬浮细胞（suspension cells）是指无需依附于培养基底面，可以在液体培养基中自由悬浮、生长和分裂的细胞。例如，Jurkat人急性T淋巴细胞白血病细胞便是常见的悬浮细胞之一。常见的悬浮细胞类型及其应用领域包括：

• Jurkat：人急性T淋巴细胞白血病细胞，应用于免疫学和肿瘤学。
• K-562：人慢性骨髓性白血病细胞，常用于白血病研究和药物筛选。
• HL-60：人早幼粒急性白血病细胞，应用于细胞分化和毒性实验。
• THP-1：人急性单核细胞白血病细胞，主要用于巨噬细胞分化研究。

悬浮细胞的生长状态如何判断？

与贴壁细胞可以通过形态、贴壁情况和汇合度进行评估不同，悬浮细胞的状态判断更多依赖显微观察：

• 健康细胞的形态应为圆形或卵圆形，边缘光滑，细胞液透明或稍带颗粒，且呈均匀悬浮，少有团聚现象。
• 亚健康状态的信号为细胞颜色发灰或发暗，边缘模糊，有泡沫或碎裂，且细胞团聚或沉淀在瓶底。
• 污染信号则表现为细小颗粒快速游动（如细菌）、细胞悬液变黄、起泡沫和异味。

建议科研人员每日观察细胞，以确保细胞边缘完整，及时发现潜在问题。

悬浮细胞的密度控制

悬浮细胞没有贴壁细胞的汇合度指标，因此掌握其密度尤为重要。建议控制的悬浮细胞密度范围为（单位：细胞/mL）：

• Jurkat：初始接种密度2–5×10⁵，建议传代密度上限1–12×10⁶。
• K-562：初始接种密度2–4×10⁵，建议传代密度上限1×10⁶。
• THP-1：初始接种密度3–5×10⁵，建议传代密度上限1×10⁶。

选择合适的细胞密度可避免因密度过低导致的细胞增殖困难，或因密度过高造成的代谢障碍。

悬浮细胞的最佳培养方法

1. 培养容器：推荐使用T型瓶（如T25、T75），需注意轻柔摇晃，避免细胞黏附。更优选择为专用无涂层培养瓶、旋转瓶或摇瓶，有助于细胞均匀分布。
2. 培养基：使用RPMI-1640，这是一种广泛用于多种白血病细胞的培养基，可以添加10%-20% FBS，必要时加入IL-2、PMA等诱导剂。
3. 通气方式：使用透气瓶盖确保氧气供应，维持培养箱内的CO₂为5%、温度37°C、湿度90%。
4. 传代方法：每2–3天传代一次，轻轻离心后重悬于新鲜培养液中，定量稀释至推荐浓度。

常见误区与应急措施

在悬浮细胞培养中，常见误区包括：

• 误认为培养瓶越满越好，实际上应留有空间以促进气体交换，建议最多装入1/2-2/3的体积。
• 仅凭肉眼来判断浑浊度是不够的，需结合显微镜观察与细胞计数。
• 认为长时间不传代可以使细胞更强大，过高的细胞密度会导致凋亡和毒性反应。
• 一旦出现死细胞，不应立刻更换培养基，首要是离心洗涤并重悬，以避免死细胞碎片影响健康细胞。

当遇到问题时，合理的急救措施应包括低速离心去除上清和碎片，调整培养基密度，或使用酶处理分散细胞团聚。

尊龙凯时提示：养好悬浮细胞的关键在于精细控制密度和持续观察状态，这是一项动态管理的过程。掌握以上技巧，您将能够有效地培养出健康的悬浮细胞。