在进行Western Blot（WB）实验时，研究人员最怕遇到什么问题？诸如条带模糊、数据崩溃等情况的出现，细查后发现往往是内参选择不当导致的。内参的角色就如同细胞中的“稳定打工人”，其表达量几乎不变，负责校准样本量和消除数据误差。若没有合适的内参，半定量结果便如同没有秤砣的秤，完全依赖于经验和猜测。

一、分子量的重要性

首先，注意分子量的选择——目的蛋白与内参之间的差距应超过5 kD，才能有效避免条带重叠的问题，避免呈现“情侣装”的状况。

二、抗体定位的选择

其次，关于抗体的选择，若研究的是核蛋白，使用β-actin就不合适，因为核内根本不存在β-actin。推荐使用PCNA（29 kD）或Histone H3（17 kD），它们的表现更加理想。

三、组织样本的特殊性

此外，不同组织的特点需要特别关注——例如，脂肪组织中的β-actin表达量偏低，建议更换为GAPDH。而在肌肉样本中，tubulin可能会崩溃，此时actin反而会更稳。即便是同一种β-actin，N端抗体在心肌组织中可能会消失，而C端抗体却能稳定地显示条带。

四、抗体选择时的注意事项

购买抗体前务必要仔细查看抗原位点，避免因“组织特异性”导致的误差。全细胞或胞浆样本推荐使用β-actin或GAPDH；核蛋白样本可选用PCNA或Histone H3；对于大蛋白样本，则使用β-tubulin；特殊样本更应先进行文献查阅再做决策。

只有选择合适的内参，才能为WB实验提供稳定的结果。在此，希望通过尊龙凯时提供的产品，帮助您在生物医疗研究中获得更加精准、可靠的数据！