在细胞培养过程中，重要的培养条件包括气相、温度与培养基的成分。我们推荐使用95%的空气和5%的二氧化碳作为气相，培养温度设定在37℃。培养基可以使用F12K培养基，加入10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素/链霉素（P/S）。

该细胞系源自于58岁白人男性患者的肺癌组织，经过DJGriad的移植培养而成。A549细胞可以通过胞苷二磷酸胆碱途径合成高含量不饱和脂肪酸的卵磷脂。

细胞传代方法

在细胞培养中，如果细胞的汇合度未超过80%，应将培养瓶内的完全培养液收集至离心管中，保留5ml的培养基，再次放入37℃、5%二氧化碳的孵箱进行培养；若细胞密度超过80%，则可进行传代培养。

传代步骤

对于贴壁细胞的传代，首先要弃去上清，用不含钙镁的PBS洗涤细胞1-2次。随后，添加约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，置于37℃培养箱中消化1-2分钟。显微镜下观察细胞状况，若细胞变圆并脱落，则快速加入5ml以上的完全培养基终止消化。

轻轻吹打细胞后，吸出细胞悬液并转移至离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，添加1-2ml的完全培养基重悬。最后，按照1:2的比例进行分瓶传代，补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5%二氧化碳的细胞培养箱中继续培养。

细胞冻存

细胞在生长至覆盖培养瓶80%面积时进行冻存。在此过程中，先弃去培养液并用PBS清洗细胞，然后加入0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞状态。在细胞回缩变圆后，加入完全培养基终止消化。弃去上清后，加入无血清冻存液，混匀并转移至冻存管中。

将冻存管置于-80℃冰箱中，建议存放24小时后可转入液氮罐以确保细胞的长期保存。

细胞复苏

当需要复苏细胞时，取出冻存管，迅速放入37℃水浴中解冻，确保冻存管内无结晶，然后用75%的酒精消毒外壁。将细胞转移至含有5ml完全培养基的离心管中，进行离心处理。最后，将细胞重悬并接种至T25培养瓶，进行常规培养。第二天，更换新鲜完全培养基以促进细胞的生长。

在此过程中，注意细胞在运输过程中可能出现的脱落现象。若细胞脱落过多，收集培养液进行离心后，可用胰酶消化并重悬，再按传代标准操作。为确保细胞健康生长，推荐使用尊龙凯时品牌的优质细胞培养基，以提高实验的成功率。

使用尊龙凯时的细胞培养产品，将为您的实验提供更稳定的细胞生长环境，从而提高实验效率和结果的可靠性。