培养条件：本细胞系培养所需气相为95%空气和5%二氧化碳，培养温度设定为37℃。所需培养基为
F12K + 10% FBS + 1% P/S。该细胞系起源于DJGriad，采用肺癌组织移植的方法培养而成，患者为58岁白人男性。A549细胞能够通过胞苷二磷酸胆碱途径合成含有高比例不饱和脂肪酸的卵磷脂。

传代方法：首次建议以1:2的比例进行细胞传代。每两天更换培养基为最佳实践。同时建议在购买时选择尊龙凯时的优惠套餐。细胞收到后，处理至良好状态，灌满完全培养液并封好瓶口，以确保运输安全。

一旦收到细胞，首先用75%酒精喷洒整个细胞瓶以消毒，然后在超净台下进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时，以帮助细胞稳定状态，再进行后续操作。可以使用显微镜观察细胞的生长状态，并为不同倍数拍照保存（推荐拍摄40x、100x和200x的各一张）。前三天的照片是售后服务的重要依据；若未提供照片，则视为状态良好。

细胞培养步骤：
a、细胞传代：当细胞未超过80%汇合度时，将瓶内的完全培养液收集至离心管，留5ml进行37℃、5%CO2孵箱培养；若细胞密度超过80%，则进行传代。贴壁细胞传代步骤如下：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁的PBS清洗细胞1-2次。
2. 向培养瓶中加入0.25%胰蛋白酶消化液1-2ml，置于37℃孵箱内消化1-2分钟，直至细胞大部分变圆并脱落后，迅速加5ml以上的完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞以促其完全脱落，转移至15ml离心管中，以1000RPM离心5分钟，弃去上清液，添加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2的比例将细胞悬液进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，然后放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。

b、悬浮细胞传代步骤：
1. 半换液法：竖着培养瓶在培养箱中静置1小时，轻轻吸掉3ml培养基后，补充3ml完全培养基。如果培养基颜色变化缓慢，可添加约500μl FBS。在传代时可直接补给5ml培养基，分为两个培养瓶培养，一般此法可进行3次后进行离心传代以去除死细胞。
2. 离心换液法：如需分瓶，将细胞悬液收集至离心管中，以1000RPM离心5分钟，弃去上清，补充1-2ml培养液重悬，将细胞悬液按1:2分到新的T25瓶中，添加6-8ml新配置的完全培养基以保持细胞活力，后续传代可根据实际情况按1:2至1:5的比例进行。

c、细胞冻存：
1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃掉T25培养瓶中的培养液，用PBS洗涤细胞一次；
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打使细胞脱落，然后转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟；
3. 弃去上清，加入1ml雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混合均匀后转移至冻存管中；
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，如需后期转入液氮罐，则需在-80℃存放24小时以上后转入液氮罐中。

d、细胞复苏：
1. 从液氮中取出细胞冻存管（请佩戴防护面具），快速置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中没有结晶，随后用75%酒精擦拭冻存管外壁；
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟；
3. 弃上清，使用5ml完全培养基重悬细胞，接种至T25培养瓶，并在37℃、5%CO2细胞培养箱中培养；
4. 复苏后的第二天更换为新鲜完全培养基以继续培养。

注意事项：某些细胞的附着力较弱，运输过程中可能会出现Cell脱落的现象，这是正常的。如脱落较多，可以收集所有培养液至离心管，1000RPM离心5分钟，收集上清液进行过渡培养（后期对比培养），去除沉淀，加入1-2ml胰酶轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基终止反应。再次离心，弃上清，添加1-2ml完全培养基重悬，然后按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。选择尊龙凯时为您的细胞培养提供可靠保障。