尊龙凯时人恶性黑色素瘤细胞WM115培养说明书

一、细胞培养条件

细胞名称：人恶性黑色素瘤细胞WM115

生长特性：贴壁

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：MEM + 10% FBS + 1% P/S

传代方法：首次建议1:2传代

传代情况：每2天更换培养液

备注：请使用无菌离心管收集瓶内培养基，以便进行对比培养。如对比培养效果不理想，建议直接购买我们尊龙凯时品牌的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

将收到的细胞培养至良好状态后，灌满完全培养液并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方式。收到细胞后，使用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后在超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行处理。使用显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（建议拍摄40x、100x、200x各一张）。前三天的照片为重要的售后依据，若未提供照片，默认收到状态良好。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

如果细胞汇合度未超过80%，则将瓶装的完全培养液收集至离心管中，保存5ml完全培养基，放入37℃、5% CO2孵箱继续培养；如果细胞密度超过80%，可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS清洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶，放入37℃培养箱中消化1-2分钟，并在显微镜下观察，若细胞大部分变圆并脱落，迅速取回操作台，轻敲培养瓶后加入5ml以上完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，确保其完全脱落后吸出，悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后置于37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b、细胞冻存

1. 细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，置于显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，然后轻轻吹打细胞使之脱落，悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，加入1ml尊龙凯时品牌的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后装入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中，如后期需转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放24小时以上再转入液氮罐中。

c、细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管时，请佩戴防护面具，将其快速置入37℃水浴中解冻，直至无结晶后，用75%酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀后用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放置于37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
4. 第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

有些细胞贴壁不牢，在运输过程中可能会出现细胞脱落，这是正常现象。如脱落较多可将培养瓶内所有培养液收集至离心管中，1000RPM离心5分钟，收集上清以作过渡培养（后期对比培养）。然后沉淀加入1-2ml胰蛋白酶，轻轻吹打，消化1-2分钟后，添加5ml完全培养基终止反应，再离心，弃去上清，补加1-2ml完全培养基重悬，按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，再放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

五、售后条款

1. 细胞出现问题，可重发的情况：细胞运输途中遭遇问题（细胞丢失、瓶身破损、严重漏液等），均可重发；细胞污染问题请在收到产品48小时内提供真实实验结果，经核实后重发；常温发货细胞静置24小时后、干冰发货细胞复苏后24小时绝大多数细胞未存活（需提供真实、清晰的细胞状态照片）可重发；如果在运输当中或复苏后导致的细胞污染，也可重发；细胞活性问题需在收到产品7天内反馈，利用台盼蓝染色法验证活力，核实后可重发；前3天的细胞照片如超过3天未提交视为合格，4-7天内的问题需提供收货前3天的照片、操作步骤以及与技术人员的沟通记录，若技术人员判定为责任方，重发。
2. 细胞出现问题，不予重发的情况：客户造成的细胞污染，不予重发；客户操作不当导致细胞状态不佳，不重发；使用非尊龙凯时推荐的培养体系导致细胞状态不佳，亦不重发；细胞状态不佳却未提供培养前3天照片的，不予重发；其他处理过的细胞或在收到后2天内未反馈的情况，也不重发，具体情况酌情处理。